La néomycine ELISA Kit

        Kit de dosage immunoenzymatique compétitif Analyse quantitative de la néomycine 1. Contexte La néomycine de résidus dans la production de produits biologiques peut conduire à des réactions anormales des êtres humains, et donc la stricte des LMR ont été établies.  Ce kit est un test rapide produit pour la détermination de la tétracycline des résidus qui est sensible, précis et un gain de temps. Il peut réduire considérablement le fonctionnement des erreurs dans l'essai. 2. Principe de test Ce kit ELISA est conçu pour détecter la néomycine basé sur le principe de " indirect-concurrentiel " enzyme immunoassay. Le puits Microtiter sont enduites avec capture BSA-liées antigène. La néomycine dans l'échantillon est en concurrence avec l'antigène enduits sur la plaque de microtitrage pour l'anticorps. Après l'ajout d'enzyme conjugué, substrat chromogène est utilisé et le signal est mesurée par le spectrophotomètre. L'absorption est inversement proportionnelle à la néomycine concentration dans l'échantillon. 3. Les applications Ce kit peut être utilisé en  analyse quantitative et qualitative de la néomycine de  résidus dans les échantillons biologiques. 4. Les réactions croisées La néomycine...............................…..…100 % La streptomycine ..................…...…...<1 % À la kanamycine...............…..........…<1 % L'apramycine ................................  <1% De gentamycine ...........................................  <1% La tobramycine ..................….........….<1 % 5. Matériel requis 5.1 Équipement : Spectrophotomètre Microtiter plaque (450 nm/630nm) Tube à centrifuger wapolystirene : 2ml, 50ml Micropipettes : 20ml-200ml, 100ml-1000ml 250ml-multipipette 5.2 Réactifs : L'eau désionisée 6. Composants du kit Avec la plaque 96 puits Microtiter enduit d'  antigène de couplage Solutions standard de la néomycine×6 bouteilles : 1 ml/bouteille 0ng/ml, 0.5NG/ml,1.5NG/ml,4.5NG/ml,13,5 ng/ml, 40,5 ng/ml    Solution étalon de fortification : 1ml, 1 μg/ml  Conjugué enzymatique  (7ml)…..........….....bouchon rouge   (7 ml de solution d'anticorps)............…capuchon vert Une solution de substrat (7ml).............…le capuchon blanc Solution de substrat B (7 ml)............….…bouchon rouge Solution d'arrêt (7 ml)..................bouchon jaune La solution de lavage 20×concentré(40ml)  .....................…..Capuchon transparent 2×diluant échantillon(50ml)   ............................ Bouchon bleu 7. Préparation des réactifs : Solution 1 : exemple de diluant Diluer le diluant 2×échantillon avec l'eau désionisée dans le volume ratio de 1:1, qui sera utilisé pour la dilution des échantillons. Cette solution peut être stockée à 4 ºC pendant 1 mois. Solution 2 : solution de lavage Diluer la solution de lavage 20×concentré avec l'eau désionisée dans le volume ratio de 1:19, qui sera utilisée pour laver les plaques. Cette solution peut être stockée à 4 ºC pendant 1 mois. 8. Préparatifs de l'échantillon 8.1 Avis et Précautions pour les utilisateurs avant de fonctionnement : A. Veuillez utiliser one-off de conseils dans le processus d'expérience, et de modifier les conseils d'absorber différents réactif. B. Vérifiez que tous les instruments expérimentaux sont propres , sinon il aura pour effet d'essai résultat. 8.2 Préparation des échantillons : ---- Diluer l'échantillon avec l'échantillon préparé diluant pour obtenir une concentration finale de 0.5-40,5 ng/ml (néomycine). ----Prendre 50 ml de solution préparée pour l'assay. 9. Processus de dosage 9.1 Avis avant d'essai : 9.1.1 Vérifiez que tous les réactifs et les micropuits sont tous à température ambiante (20-25 ºC). 9.1.2 Retour tous les réactifs de repos à 2-8ºC immédiatement après avoir utilisé. 9.1.3 Laver les micropuits correctement est une étape importante dans le processus de dosage; c'est le facteur essentiel à la reproductibilité de l'ELISA L'analyse. 9.1.4 d'éviter la lumière et de couvrir les micropuits au cours de l'incubation. 9.2 Étapes 9.2.1 Prendre tous les réactifs à la température ambiante (20-25 ºC) pendant plus de 30 min, homogénéiser avant utilisation. 9.2.2 Obtenir les micropuits nécessaires et le reste de retour dans le sac à fermeture par glissière à 2-8ºC immédiatement. 9.2.3 La solution de lavage doit être amené à température ambiante (20-25 ºC)  avant utilisation. 9.2.4 Nombre : nombre chaque micropuits position et toutes les normes et les échantillons doivent être exécutées en double. Enregistrer les normes et des échantillons des postes. 9.2.5 Ajouter la solution standard/sample, conjugué enzymatique et l'anticorps : ajouter 50 µl de solution étalon ou de l'échantillon préparé à puits correspondant. Ajouter 50 µl de solution conjugué enzymatique,50µl de solution d'anticorps à chaque puits, mélanger doucement par agitation de la plaque manuellement et incuber pendant 40min à 25 ºC avec couvercle. 9.2.6 Laver : déposer le couvercle doucement et verser le liquide des puits et rincez les micropuits avec 250 µl de solution diluée de solution de lavage(2) à l'intervalle de 10s pour 4 à 5 fois. Absorber l'eau résiduelle avec du papier absorbant (le reste de l'air bulle peut être éliminé avec pointe inutilisé). 9.2.7 La Coloration : ajouter 50 µl de solution A et 50µl de solution B à chaque puits. Mélanger doucement par agitation de la plaque manuellement et incuber pendant 15 min à 25ºC avec couvercle (voir 12.8)   9.2.8 Mesure : ajouter 50 µl de la solution d'arrêt à chaque puits. Mélanger doucement par agitation de la plaque manuellement et mesurer l'absorbance à 450 nm contre un air vierge (il est recommandé de mesurer avec le double longueur d'onde de 450/630nm. Lire le résultat dans un délai de 5 min après l'addition de solution d'arrêt. ) (On peut aussi mesurer par la vue sans solution d'arrêt en bref de l'ELISA reader). 10. Les résultats (1) Pourcentage de l'absorbance Les valeurs moyennes de l'absorbance valeurs obtenues à partir de la normes et les échantillons sont divisés par la valeur d'absorbance de la première standard (standard zéro ) et multiplié par 100 %.    = B --l'absorbance de normes ou des échantillons B0 --l'absorbance zéro standard (0ng/ml) (2) Courbe standard ---Pour dessiner une courbe standard : la valeur des normes absobance comme axe des y, semilogarithmic de la concentration des normes (ng/ml) comme axe des x. ---La néomycine concentration de chaque échantillon  (ng/ml), qui peuvent être lues à partir de la courbe de calibrage, est multiplié par le taux de dilution correspondante de chaque échantillon suivie, et la concentration réelle de l'échantillon est obtenu. 11. La sensibilité, de l'exactitude et précision Gamme linéaire : 0.5-40.5ng/ml Précision : 100±30 % Précision :  CV de la trousse ELISA tous moins de 10 %. 12. Avis 12.1 Les valeurs moyennes de l'absorbance valeurs obtenues pour les normes et les échantillons seront réduites si les réactifs et des échantillons n'ont pas été réglementé à température ambiante (20-25 ºC). 12.2 ne permettent pas de micropuits à être sec entre les étapes pour éviter la répétition infructueuse et faire fonctionner l'étape suivante immédiatement après l'appuyez sur les micropuits titulaire. 12.3 mélanger l'homogénat et éluer la plaque de manière adéquate. 12.4 Éviter la solution d'arrêt de toucher la peau pour l'2M H2SO4. 12.5 Ne pas utiliser les kits de date. Ne pas échanger les réactifs de lots différents, ou bien il va diminuer la sensibilité. 12.6 Constitution de stockage : Garder les trousses ELISA à 2-8ºC sans gelée. Éviter la lumière directe du soleil au cours de toutes les incubations. Couvrant les plaques de microtitration est recommandée. 12.7 Les réactifs vont mal : Solution de substrat doit être abandonnée si sa couleur a changé. Les réactifs peuvent être tourner mal si la valeur d'absorbance (450/630nm) de la norme zéro est  inférieure à 0,5  (A450nm<0,5). 12.8 Le besoin de réaction de coloration 20-30min après l'ajout de la solution A et la solution B ; mais vous pouvez prolonger le temps d'incubation varie de 35min à 40min si la couleur est trop léger pour être déterminé. Au contraire, raccourcir le temps d'incubation correctement. 12.9 La meilleure réaction de la température est de 25ºC, température trop élevée ou trop faible à la fois conduira à des changements de sensibilité et de l'absorbance de valeurs. 13. Condition d'entreposage et période de stockage      Condition d'entreposage : 2-8ºC. Période de stockage : 12 mois.