IHC-Kit für Immunhistochemie für Kaninchen-Derived Antibody

Dieses Kit ist ein hochempfindliches zweistufiges Immunhistochemie-Kit, das für die nachfolgende Farbentwicklung von Kaninchen-abgeleiteten Primärantikörpern geeignet ist. Das Kit enthält Meerrettichperoxidase HRP-konjugiertes Ziegenanti-Kaninchen IgG. Dieses Produkt ist für Kaninchen-basierte Primärantikörper geeignet. In IHC- und Western Blot-Experimenten sind HRP-markierte sekundäre Antikörper gegen Kaninchen bei Ziegen dieselben wie von Kaninchen stammende primäre Antikörper. Antikörper (reagiert zuerst mit dem Antigen) bindet und reagiert dann mit DAB. DAB ist ein Substrat der Meerrettichperoxidase (HRP). Unter der Katalyse von HRP produziert DAB braune Präzipitate, um Signalverstärkung und Farbentwicklung zu erreichen

1. Gemäß den immunhistochemischen Routineverfahren werden die Gewebeschnitte vordeparaffinisiert, Antigen-Retrieval, blockiert und mit dem primären Antikörper inkubiert und anschließend drei Mal mit PBS für jeweils 5 Minuten gewaschen.

2. Inkubation von sekundären Antikörpern: Fügen Sie 50-100 μL der sekundären Antikörper-Arbeitslösung zu jeder Schicht hinzu, um das Gewebe vollständig zu bedecken, und inkubieren Sie bei Raumtemperatur für 30-60 min. Waschen Sie dreimal mit PBS für 5 Minuten jedes Mal.

3. DAB-Farbentwicklung: 50-100 μL DAB-Arbeitslösung zu jeder Schicht hinzufügen, mehrere Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, unter dem Mikroskop beobachten, um die Farbentwicklung auf den erwarteten Effekt zu steuern, und dann sofort mit Wasser waschen, um die Farbentwicklung zu stoppen.

4. (Optional) Wiedergewinnung von Zellkernen: Schnitte werden mit Hämatoxylin-Färbelösung für 3-5 min gefärbt und anschließend mit Leitungswasser gewaschen; nach schneller Differenzierung mit Hämatoxylin-Differenzierungslösung für 3-5 s mit Leitungswasser gewaschen; mit Leitungswasser gewaschen oder mit Hämatoxylin-Lösung 3-5 s wieder blau

5.Montage: Die Scheiben werden mit Gradientenalkohol nach den üblichen Schritten dehydriert, mit Xylol durchzogen, und die Objektträger mit neutralem Gummi montiert.

1. Wenn der Hintergrund während der immunhistochemischen Farbentwicklung zu dunkel ist, erwägen Sie eine Verlängerung der Waschzeit, verwenden Sie eine geeignete Blockierungslösung für die Blockierung, inaktivieren endogene Katalase, verkürzen Sie die Farbentwicklungszeit, und reduzieren Sie die Konzentration des sekundären Antikörpers. Wenn keine Farbentwicklung vorhanden ist oder die Farbentwicklung zu leicht ist, können Sie die Konzentration des primären Antikörpers und des sekundären Antikörpers entsprechend erhöhen, um die Farbentwicklungszeit zu verlängern, und dann prüfen, ob der sekundäre Antikörper normalerweise entwickelt wird.

2. DAB ist schädlich für den menschlichen Körper, bitte seien Sie vorsichtig, wenn Sie es handhaben, und achten Sie darauf, direkten Kontakt mit dem menschlichen Körper oder Einatmen des Körpers zu vermeiden.