1. O kit é colocado em temperatura ambiente por 30 minutos. A 20 vezes loção concentrada é diluído 20 vezes com
Desmineralizada ou destilada.
2. Adicione 100 μL de diluente de amostra e 5 μL de amostra para cada bem do teste Wells, misturar cuidadosa; um bem de blank
Sem referência líquido; dois poços de aspectos positivos e negativos, referência adicionar positivo o soro de referência e negativo
Soro de referência respectivamente 100μL/bem. Depois de fixar a película de estanqueidade, coloque a caixa em 37°C / água ou uma
Temperatura constante incubadora e incubar durante 30 minutos.
3. Descarte a película de estanqueidade e lavar a placa com placa de uma máquina de lavar roupa ou de lado, para que cada wells é preenchido com
O líquido de lavagem sem transbordar (cerca de 300 μL), o tempo de imersão é de 10 segundos, a placa é lavada 5 vezes,
E finalmente em papel absorvente.
4. Adicione 100 μL de enzima trabalhando solução de referência para cada bem (excepto os poços em branco), depois de fixar a estanqueidade
Filme, coloque a caixa em 37°C / água ou uma temperatura constante incubadora e incubar durante 30 minutos.
5. Como no procedimento acima de 3, lavar a placa e secar.
6. Adicionar 50 μl de solução de substrato e solução de coloração para cada bem em seqüência, agite suavemente e misture bem. Depois de
Fixar a película de estanqueidade, coloque a caixa em 37°C / água ou uma temperatura constante incubadora, e incubar durante 10
Minutos no escuro.
7. Descarte a película de estanqueidade, adicionar 50 μl da solução de paragem de cada poço, agite suavemente para misturar, medir o valor do diâmetro externo com uma
Leitor de microplacas no comprimento de onda de 450nm (ajuste de zero com poços em branco), e imprimir os resultados.
Resultados:
1. Amostra valor OD ≥ Cortada, valor considerado como positivo, amostra OD valor < Cortada valor, julgados como negativa.
2. Cortar=3,1×Média do valor de referência negativa (quando a média do valor do diâmetro externo de negativo é <0,05, é
Calculada como 0,05; quando a média do valor do diâmetro externo de negativo é ≥ 0,05, é calculado como o valor real).
3. Em circunstâncias normais, a negativa <0,10, o positivo ≥ 1,0.