[لينكوميسين] [إليسا] إختبار عدة لعسل

  مجموعة المناعية للإنزيم التنافسي لـ التحليل الكمي للينكوميسين   1. الخلفية إن لينكوميسين عبارة عن مضاد حيوي ضيق الطيف، والذي قد يمنع تخليق البروتين من السباكلي، ولكن بكاسيلي لديه مقاومة جزئية للتقاطع مع هذا العقار وغيره من الأدوية الكبيرة. إن تناول هذا العقار غير فعال، وقد تحدث أعراض قنوات غذائية مثل naupathia وanabole  وglossis  وبالمقوم  والإسهال والحكة في 10% إلى 20% من المرضى الذين يتناولون هذا العقار؛  وتتركز عملية تأيض هذا العقار في الكبد في الأساس، ومن الممكن إفرازه عن طريق الكلى، وممر البلية، والقناة المعوية، حيث يتم إفراز 40% منه في النموذج الأولي باستخدام دجيكتأ. هذه المجموعة هي منتج جديد يستند إلى تقنية EISA، التي تتميز بالسرعة (45  دقيقة فقط في عملية واحدة)، وسهولة ودقة وحساسية مقارنة بتحليل الأدوات الشائعة، وبالتالي يمكنها تقليل أخطاء التشغيل وكثافة العمل إلى الحد الأدنى.   2) مبدأ الاختبار تم تصميم مجموعة EISA هذه لاكتشاف lincomycin استنادًا إلى مبدأ EISA "غير المباشر المنافسة". تم طلاء الآبار الصغيرة بمضادات BSA المرتبطة ببعضها. ينافس [لينكوميسين] في العينة مع المستضدات ل يربط إلى الرقم محدودة الجسم المضاد. بعد إضافة إنزيم المرافق والركيزة TMB ، يتم قياس الإشارة باستخدام مقياس ضوئي EISA. يتناسب الامتصاص عكسيًا مع تركيز lincomycin في العينة. 3. التطبيقات يمكن استخدام هذه المجموعة  في التحليل الكمي والنوعي  لبقايا الليكومين في العسل، الهلام الملكي، وما إلى ذلك 4) التفاعلات المتبادلة Lincomycin........................ 100% Clindamycin........................ 1. 5% Kiten amycin.................. .........<0.1% Spiramycin......................... <0.1% إريثرومايسين...................... …<0.1% تايلوسين........................ ...<0.1% Tilmicosin........................ …<0.1% أبراميعام....................... ...<0.1% تيامولين.................. ….…......... …<0.1% Spectinomycin.................. …<0.1% 5) المواد المطلوبة 5.1 المعدات: ---جهاز قياس الطيف الضوئي للوحات Microtter (450 نيوتن متر/630 نانومتر) --- آلة التجفيف الدوارة/النيتروجين ---المسانِس ---- شاكر ---- خلاط Vortex ------------ ----- التوازن التحليلي (المحاثة: 0.01g) --- الماصّة المتدرّجة: 10 مل --- لمبة ماصة مطاطية -------------------------- ---------------------- --- أنبوب الطرد المركزي البوليسترين: 2 مل، 10 مل، 50 مل ---ماصات صغيرة: 20 مل-200 مل، 100 مل-1000 مل 250ul-multipmipاصّة   5.2 عوامل إعادة الوكلاء: -- الميثانول (AR) ----- n-هكسان ----- الكلوروفورم (ثلاثي الكلوروميثان، AR) -- كربونات الصوديوم اللامائي (Na2CO3، AR) (للعسل) ---NahCO3 (AR, for عسل) ------------------ 6. مكونات المجموعة لوحة Microtter مع 96 بئراً مغلفة بمضادات حلول Lincomycin القياسية (6×1 مل/زجاجة) 0 ppb,0.1ppb,0.3ppb,0.9ppb,2.7ppb,8.1ppb  الحل القياسي الملمع: (1 مل/زجاجة) صفحة في الدقيقة إنزيم  يقوتان 1 مل..............red cap محلول الجسم المضاد 7 مل غطاء .............green محلول الركيزة هو غطاء أبيض. بحجم 7 مل محلول الركيزة  B 7 مل ............ غطاء أحمر توقف عن المحلول  7 مل................الغطاء الأصفر محلول الغسيل المركز 20× 40 مل ..........................غطاء شفاف 2محلول الاستخراج المركّز  50 مل .................................... غطاء أزرق 7) تجهيز وكلاء إعادة المواد: الحل الأول: محلول الميثانول امزج 70 مل من الميثانول مع 30 مل من الماء، وامزج الخليط تمامًا. الحل الثاني: 0.1 مليون CB (ph=10.6) قم بإذابة 4.66 g من كربونات الصوديوم اللامائي، 0.5g من NaHCO3 بالماء وخفف إلى 500 مل. الحل الثالث: حل الاستخراج خفف محلول الاستخراج 2Xركاز بالماء منزوع الأيونات بنسبة الحجم 1:1 (أو وفقاً للمتطلبات)، والذي سيتم استخدامه لاستخراج العينة. يمكن الحفاظ على محلول الاستخراج المخفف لمدة شهر واحد عند 4 درجات مئوية. الحل  الرابع: محلول الغسيل خفف محلول الغسيل 20Xركاز بمقدار الماء منزوع الأيونات بنسبة 1:19 (أو وفقًا للمتطلبات)، والذي سيتم استخدامه لشطف اللوح. يمكن الحفاظ على محلول الغسيل المخفف لمدة شهر واحد على 4 درجات مئوية. 8) تجهيزات العينات 8.1 الإشعار والاحتياطات قبل التشغيل: (أ) يرجى استخدام نصائح لمرة واحدة في عملية التجربة وتغيير النصائح عند امتصاص عوامل إعادة التصنيع المختلفة. )ب( التأكد من نظافة جميع الادوات التجريبية. )ج( ينبغي استخدام العينات المعالجة في الفحص على الفور. 8.2  العسل: 8-2-1 الطريقة أ ------------------------------------------------------------------ ثم هزّ بالكامل لمدة دقيقتين باستخدام الغربال. ----------------------------------------------------------------    --- يأخذ 50 مل من المحلول المعدة للفحص. 8-2-2 الطريقة ب -------------------------------------------------------------------  ثم هزّ بالكامل لمدة دقيقتين. ------ أضف 8 مل من الكلوروفورتكس وفورتكس لمدة دقيقتين. ---قم بإجراء الطرد المركزي بقوة جاذبية تبلغ 3000 درجة لمدة 5 دقائق، في درجة حرارة الغرفة. -------- إزالة قطب الماء، ونقل 4 مل من أنبوب الزجاج النظيف 10 مل ، وجفف مع 50 - 60 درجة مئوية من المياه حوض النيتروجين الغاز تيار. ----- أضف دوشة واحدة من النترات الهكسان - ملليلتر لمدة 30 ثانية، ثم أضف محلول استخلاص 1 ملليلتر (المحلول 3). الدوامة لمدة 30 ثانية. ---قم بإجراء الطرد المركزي بقوة جاذبية تبلغ 3000 درجة لمدة 5 دقائق، في درجة حرارة الغرفة ------- قم بإزالة الطبقة العضوية الطافية، واستغرق 50 مل من محلول طبقة الركيزة لإجراء الفحص. 9.خطوات الأسي: 9.1 إشعار قبل الفحص: 9.1.1 تأكد من أن جميع المواد التي يتم تسخينها والمواد الغذائية في الميكروويف في درجة حرارة الغرفة (20-25 درجة مئوية). 9.1.2 إرجاع جميع عوامل إعادة النشاط المتبقية إلى 2-8 درجة مئوية بعد الاستخدام مباشرة. 9-1-3 غسل الميكروويف بشكل صحيح خطوة مهمة في عملية الفحص؛ فهو العامل الحيوي لإعادة إنتاج تحليل EISA. 9-1-4 تجنب الإنارة وتغطية الميكروويف أثناء حضانة الميكروويف. 9.2 خطوات الصعود: 9-2-1 أخرج كل المواد المعاد تشويها في درجة حرارة الغرفة (20-25 درجة مئوية) لأكثر من 30 دقيقة، ثم هزها بلطف قبل استخدامها. 9.2.2 أخرج الميكروويف المطلوب وأعد الباقي إلى الحقيبة المزودة بسحّاب في درجة حرارة 2-8 درجة مئوية على الفور. 9-2-3 يجب إعادة تسخين محلول الغسيل قبل الاستخدام. 9-2-4 الرقم: رقم كل موقع في الميكروويف وكل المعايير والعينات يجب أن تعمل بشكل متكرر. سجّل مواضع المعايير والعينات. 9-2-5 إضافة محلول قياسي  /  نموذج: أضف 50 ميكرولتر من المحلول القياسي أو عينة معدة إلى الآبار المناظرة. 9.2.6. اخلط محلول الجسم المضاد مع إنزيم المرافق .Mix antody Solution و الإنزيم المرافق في نسبة الحجم 10:1،MIX بالكامل .(ملاحظة، لا يمكن أن يكون هذا المحلول المختلط مخزونًا، يجب استخدامه بعد المزيج مباشرة .) 9.2.7.أضف محلول مزيج 50 ميكرولتر من محلول الجسم المضاد والانزيم المرافق في كل بئر، ثم امزجها برفق عن طريق هز الطبق يدويًا وحاضنها لمدة 30 دقيقة على 25 درجة مئوية مع تغطية. 9.2.8  الغسيل: قم بإزالة الغطاء برفق وضع السائل في الآبار واشطف الميكروويف بواسطة محلول الغسيل المخفف 250 ميكرولتر (المحلول  4) على فترات زمنية تبلغ 10 ثوانٍ لكل 3 إلى 4 مرات.  امتصّ المياه المتبقية باستخدام ورق ماص. 9-2-9  اللون: أضف محلول 50 ميكرولتر A و50 ميكرولتر B إلى كل بئر. امزجها برفق عن طريق هز اللوح يدويًا وحاضنة لمدة 15 دقيقة على درجة حرارة 25 درجة مئوية مع الغطاء (راجع 12.8). 9.2.10  القياس: أضف 50 ميكرومتراً محلول الإيقاف إلى كل بئر. امزجها برفق عن طريق هز اللوحة يدويًا وقياس الامتصاص عند 450 نيوتن متر (وهو قياس مقترح مع الطول الموجي المزدوج 450/630 نانومتر. اقرأ النتيجة في غضون 5 دقائق بعد إضافة حل التوقف). 10. النتائج 10.1 نسبة الامتصاص يتم تقسيم القيم المتوسطة لقيم الامتصاص التي تم الحصول عليها للمعايير والعينات على قيمة الامتصاص للمعيار الأول (معيار الصفر) ويتم ضربها في 100%. وبالتالي فإن معيار الصفر يساوي 100% ويتم تحديد قيم الامتصاص بنسب مئوية.     ب - معيار الامتصاص (أو العينة) B0 -- لامتصاص صفر معيار 10.2 منحنى قياسي --- لرسم منحنى قياسي: خذ قيمة امتصاص المعايير كمحور ص، شبه لوغاريتمي لتركيز  محلول معايير اللينكومين (ppb) كمحور س. ---- يتم ضرب تركيز الليكومين لكل عينة (ppb)، التي يمكن قراءتها من منحنى المعايرة، في معامل التخفيف المقابل لكل عينة متبوعة، ويتم الحصول على التركيز الفعلي للعينة. يرجى ملاحظة: وقد تم تطوير برامج خاصة لجميع برامج تقليل البيانات، والتي يمكن توفيرها عند الطلب. عامل التخفيف: العسل: الطريقة أ...... .....10 الطريقة ب...... ... .2 11) الحساسية والدقة والدقة اختبار الحساسية: 0.1 جزء في المليون حد الاكتشاف: العسل: الطريقة أ........................ ... 1.0جزء في المليون الطريقة ب........................ ... 0.2ppb الدقة: العسل......................... ... 85±15%