[تلر] [إليسا] إختبار عدة

مجموعة مناعة الإنزيم المنافسة لـ التحليل الكمي لتيلوسين 1. الخلفية تيلوسين هو مضاد حيوي لمضادات الكلاميرويد، والذي يتم تطبيقه بشكل أساسي على مضاد  للبكتيريا ومضاد Mycoplasma.  وقد تم إنشاء ملجأ صارم من أجل رصد الحد من ا للس ل نظرا ن هذا العقار قد يؤدي إلى أثر جانبي خطير في بعض المجموعات. هذه المجموعة هي منتج جديد يستند إلى تقنية EISA، التي تتميز بالسرعة والسهولة والدقة والحساسية مقارنة بتحليل الأجهزة الشائعة وتحتاج فقط إلى ساعة ونصف في عملية واحدة، ويمكنها تقليل أخطاء التشغيل وشدة العمل بشكل كبير. 2) مبدأ الاختبار تستند هذه المجموعة إلى تقنية EISA غير المباشرة التنافسية. تم طلاء آبار الميكروتيتر بمضادات التوصيل. وتنافس بقايا تيلوسين في العينة مع المستضد المطلي على صفيحة الميكروتيتر للجسم المضاد. بعد إضافة إنزيم يسمى antiody، يتم استخدام ركيزة TMB لتوضيح اللون. يرتبط امتصاص العينة بشكل سلبي بالتيفلوسين الموجود فيها، بعد مقارنته بالمنحنى القياسي، مضروبًا في عامل التخفيف، يمكن حساب كمية بقايا التيفوسين في العينة. 3. التطبيقات يمكن استخدام هذه المجموعة  في التحليل الكمي والنوعي لبقايا تيلوسين في العسل. 4) التفاعلات المتبادلة تايلوسين............................. 100% تيميكوسين........................... 40% 5) المواد المطلوبة 5.1 المعدات: مقياس الطيف الضوئي للوحات Microtter (450 نيوتن متر/630 نانومتر) المبخر الدوار أو أدوات تجفيف النيتروجين الغربال ميكسر النورتيكس قم بإجراء الطرد المركزي التوازن التحليلي (المحاثة: 0.01g) الماصّة المتدرّجة: 10 مل لمبة ماصة مطاطية أنبوب اختبار زجاجي: 10 مل أنابيب الطرد المركزي المصنوعة من البوليسترين: 50 مل ماصات صغيرة: 20-200 مل، 100-1000 مل 250 مل-ماصة متعددة 5.2 عوامل إعادة الوكلاء: -- أسيتوميتريل (AR) ---- NaOH(AR) ----N-Hexane ---------------- 6. مكونات المجموعة لوحة Microtter مع 96 بئراً مغلفة بمضادات حلول قياسية (6 زجاجات، 1 مل/زجاجة) 0ppb,1.5 ppb,4.5ppb,13.5 ppb,40.5ppb,121.5ppb  التحكم القياسي في النتوءات: (1 مل/زجاجة) صفحة في الدقيقة إنزيم يتوافق 12 مل................. غطاء أحمر حل الجسم المضاد غطاء 7ml.............green الحل A 7 مل.................الغطاء الأبيض الحل ب 7 مل........................... الغطاء الأحمر إيقاف الحل 7 مل................. أصفر محلول غسيل مركّز 20×40 مل .......................... غطاء شفاف محلول الاستخراج المركّز 2×50 مل .............................. blue cap تحضير إعادة الوكلاء الحل الأول. 0.1 مليون هيدروكسيد إذابة  0.4g NaOH بماء منزوع الأيونات وخفف إلى 100 مل؛ الحل الثاني: Acetonitrile-0.1M NaOH خذ 84مل من الأسيتونيتريل وامزج الكمية مع 16مل من هيدروكسيد الصوديوم (NaOH) سعة 0.1 مليون لتر. الحل  الثالث: حل الاستخراج خفف محلول الاستخراج المركز 2 × مع الماء منزوع الأيونات في حصة الحجم 1:1، والتي سوف تستخدم لتخفيف تركيز الجسم المضاد والعينات. يمكن تخزين هذا الحل لمدة شهر واحد على 4 درجات مئوية. الحل  الرابع: محلول الغسيل خفف محلول الغسيل المركز 20×مع الماء منزوع الأيونات بنسبة الحجم 1: 19، والذي سيتم استخدامه لغسل الصفائح. يمكن تخزين هذا المحلول المخفف لمدة شهر واحد على 4 درجات مئوية. 8) تجهيزات العينات 8.1 الإشعار والاحتياطات قبل التشغيل: (أ) يرجى استخدام نصائح لمرة واحدة في عملية التجربة وتغيير النصائح عند امتصاص عوامل إعادة التصنيع المختلفة. (ب) تأكد من نظافة جميع الأدوات. 8.2 عيّنة العسل ------------------------------------------------------------------------------       -- - قم بإجراء الطرد المركزي في درجة حرارة الغرفة (20 - 25 درجة مئوية) لمدة 5 دقائق، أو بقوة جاذبية لا تقل عن 3000 درجة، انقل 4 مل من المادة الطافية إلى أنبوبة زجاجية سعة 10 مل، ثم جففها  باستخدام تيار غاز النيتروجين 50 - 60 درجة مئوية؛ ------- تذوب بقايا جاف باستخدام محلول استخراج 0.5 مل  (المحلول 3)،الدوامة 1 دقيقة، ثم أضف 1 مل من الهكسان -- الدوامة 30 ثانية.قم بالطرد المركزي في درجة حرارة الغرفة (20-25 درجة مئوية) لمدة 5 دقائق، على الأقل 3000 غ. ----- إزالة  المرحلة العضوية الطافية ، واستغرق 50 ميكرولتر من محلول الركيزة للفحص. 9) عملية الفحص 9.1 إشعار قبل الفحص: 9.1.1 تأكد من أن جميع المواد التي يتم تسخينها والمواد الغذائية في الميكروويف في درجة حرارة الغرفة (20-25 درجة مئوية). 9.1.2 إرجاع جميع عوامل إعادة النشاط المتبقية إلى 2-8 درجة مئوية بعد الاستخدام مباشرة. 9-1-3 غسل الميكروويف بشكل صحيح خطوة مهمة في عملية الفحص؛ فهو العامل الحيوي لإعادة إنتاج تحليل EISA. 9-1-4 تجنب الإنارة وتغطية الميكروويف أثناء حضانة الميكروويف. 9.2 خطوات الصعود: 9-2-1 أخرج كل المواد المعاد تشويها في درجة حرارة الغرفة (20-25 درجة مئوية) لأكثر من 30 دقيقة، ثم هزها بلطف قبل استخدامها. 9.2.2 أخرج الميكروويف المطلوب وأعد الباقي إلى الحقيبة المزودة بسحّاب في درجة حرارة 2-8 درجة مئوية على الفور. 9-2-3 يجب إعادة تسخين محلول الغسيل المخفف حتى يكون في درجة حرارة الغرفة قبل الاستخدام. 9-2-4 الرقم: يجب أن يتم ترقيم كل أوضاع الميكروويف وكافة المعايير والعينات بشكل متكرر. سجّل مواضع المعايير والعينات. 9-2-5 إضافة محلول/عينة قياسية: أضف 50 ميكرولتر من المحلول القياسي أو عينة معدة إلى الآبار المناظرة. إضافة محلول الجسم المضاد 50 ميكرولتر. امزجها برفق عن طريق هز اللوح يدويًا، وحضنها لمدة 30 دقيقة على درجة حرارة 37 درجة مئوية مع الغطاء. 9.2.6 الغسيل: قم بإزالة الغطاء بلطف ونقي السائل من الآبار واشطف الميكروويف بواسطة محلول الغسيل المخفف 250 ميكرولتر (المحلول 4) كل 10 ثوانٍ لمدة 4 إلى 5 مرات. قم بامتصاص الماء المتبقي باستخدام ورق ماص (يمكن التخلص من فقاعة هواء البقية باستخدام طرف غير مستخدم). 9.2.7 إضافة المرافق الإنزيمية: أضف محلول الإنزيمات المرافق 100 مل لكل بئر، ثم امزجه برفق وحاضن لمدة 30 دقيقة على 37 درجة مئوية مع تغطية.  كرر خطوة الغسيل مرة أخرى. 9-2-8 اللون: أضف المحلول A و50µl الحل B إلى كل بئر. امزجها برفق وحاضنها لمدة 15 دقيقة على 37 درجة مئوية مع تغطيتها. 9-2-9 القياس: أضف 50 ميكرولتر محلول التوقف إلى كل بئر. امزج الخفة برفق وقس الامتصاص بعزم 450 نيوتن متر مقابل فراغ الهواء (يُقترح القياس باستخدام الطول الموجي المزدوج 450/630 نانومتر. اقرأ النتيجة في غضون 5 دقائق بعد إضافة حل التوقف. يمكننا أيضًا القياس من خلال الرؤية دون حل التوقف إذا لم يكن هناك قارئ EISA). 10. النتائج 10.1  نسبة الامتصاص يتم تقسيم القيم المتوسطة لقيم الامتصاص التي تم الحصول عليها للمعايير والعينات على قيمة الامتصاص للمعيار الأول (معيار الصفر) ويتم ضربها في 100%. وبالتالي فإن معيار الصفر يساوي 100% ويتم تحديد قيم الامتصاص بنسب مئوية.                ب الامتصاص (%) = -- ×100%                  B0 ب - معيار الامتصاص (أو العينة) B0 -- لامتصاص صفر معيار 10.2 منحنى قياسي لرسم منحنى قياسي: خذ قيمة امتصاص المعايير كمحور ص، شبه لوغاريتمي لتركيز حل معايير التيفلوسين (ppb) كمحور س. -- يتم ضرب تركيز التيفوسين لكل عينة (ppb)، التي يمكن قراءتها من منحنى المعايرة، في عامل التخفيف المقابل لكل عينة متبع، ويتم الحصول على التركيز الفعلي للعينة. يرجى ملاحظة: ولتخفيض البيانات الخاصة بمجموعات EISA، تم تطوير برامج خاصة يمكن طلبها عند الطلب. عامل التخفيف للعينات: العسل: 1 11) الحساسية والدقة والدقة اختبار الحساسية: 1.5 جزء في المليون حد الاكتشاف: العسل........................ …. … دقة 1.5 جزء في المليون : عينة العسل..................... 80±15% الدقة: معامل اختلاف مجموعة ELEISA أقل من 10%. 12. إشعار 12.1 يتم تقليل متوسط قيم الامتصاص الخاصة بالمعايير والعينات إذا لم يتم تنظيم المواد المخفضة والعينات على درجة حرارة الغرفة (20 - 25 درجة مئوية). 12.2 لا تسمح للميكرويف بأن تجف بين خطوات تجنب إنتاج المواد غير الناجحة وتشغيل الخطوة التالية مباشرة بعد أن يتم ضغط حامل الميكروويف. 12.3. هزّ كل عملية إعادة وكيل برفق قبل الاستخدام. 12.4. أبعد بشرتك عن محلول التوقف، حيث أنه محلول 2M H2SO4. 12.5 لا تستخدم المجموعات بعد تاريخ الصلاحية. لا تتبادل المواد المعاد التعامل مع دفعات مختلفة، وإلا ستخفض الحساسية. 12.6  احتفظ بمجموعات EISA في درجة حرارة 2 - 8 درجة مئوية، ولا تتجمد. أطباق الميكروويف المسخنة، تجنب أشعة الشمس المباشرة أثناء حضانات الأطعمة. يوصى بتغطية ألواح الميكروتيتر. 12.7 يجب ترك محلول الركيزة إذا تحول إلى ألوان.  قد تصبح مواد إعادة امتصاص الصدمات سيئة إذا كانت قيمة امتصاص (450/630nm) للمعيار الصفري أقل من 0.5(A450nm<0.5). 12.8 يحتاج تفاعل الألوان إلى 15 دقيقة بعد إضافة المحلول A والحل B؛ ولكن يمكنك إطالة فترة الحضانة من 20 دقيقة إلى أكثر إذا كان اللون خفيفًا جدًا بحيث لا يمكن تحديده. لا تتجاوز 25 دقيقة ، على العكس، تقلل وقت الحضانة بشكل صحيح. 12.9 درجة حرارة التفاعل المثالية هي 37 درجة مئوية. تؤدي درجة الحرارة الأعلى أو الأدنى إلى تغيير قيم الحساسية والقدرة على الامتصاص. 13) حالة التخزين وفترة التخزين      حالة التخزين: 2-8 درجة مئوية. فترة التخزين: 12 شهرًا.